Preparate complexe împotriva bolilor virale și bacteriene ale albinelor pe bază de Endoglukin

             Răspândirea pe scară largă a bolilor infecțioase ale albinelor a dus în ultimii ani la o scădere bruscă a numărului de colonii de albine, iar acest lucru, după cum se știe, afectează negativ starea ecologică a mediului, randamentul culturilor entomofile și producția produselor apicole. Un grup mare de boli periculoase ale albinelor adulte, larvelor și pupelor sunt cauzate de diferite virusuri,  micoplasme, bacterii, ciuperci și alge (O.F. Grobov și colab., 1987). Adesea, decaderea coloniilor de albine se observă prezentand simultan două sau trei boli de etiologie diferită. Astfel, s-a constatat că vectorul infecțiilor virale este acarianul varroa, care este răspândit atât în ​​țara noastră, cât și în străinătate (Yu.M. Batuev, 1996; Z. Mapple, 1997 etc.). În prezent, conform Asociației Internaționale de Cercetare a Apiculturii Cardiff, au identificat cele mai periculoase 5 boli ale coloniilor de albine care amenință industria apicolă: loca americana și europeana, asco-sferoza, varroatoza și nosematoza (V.I. Maslennikova, N.Z. Zenukhina, 1998). Și, deși bolile virale nu au fost incluse în această listă, ele pot fi incluse "cu succes" în ea, deoarece daunele cauzate de acestea pot fi fatale.

             Pentru a asigura bunăstarea veterinară a stupinelor: este nevoie de combinarea tratamentului antiviral sau tratament care vizează întărirea coloniilor de albine slăbite, prin lupta împotriva leziunilor bacteriene, fungice și invazive. Un agent antiviral eficient și, în același timp, un stimulator al dezvoltării coloniilor de albine este medicamentul Endoglukin (LD Detinenko și colab., 1995), al cărui principiu activ este endonucleaza Serratia Marcescens (LV Gayevaya și colab., 1983). . Utilizarea endonucleazei și a endoglukinei permite prevenirea morții albinelor din cauza bolilor virale în perioada de primăvară și vară, vindecarea familiilor, creșterea rapidă a forței acestora, obținerea mai multor generatii de albina, miere și alte produse apicole (RI Salganik et al. , 1985; Yu.M. Batu'v, 1992; YS Alikin şi colab., 1996).

            Posibilitatea utilizării în comun antiviralului Endoglukin cu alți agenți terapeutici și profilactici utilizați în practica apicola a fost testată de noi folosind ca exemplu o serie de medicamente, care pot fi împărțite în 3 grupe: agenți antibacterieni, antifungici și acaricide. În experimentele pentru a studia efectul acestor medicamente veterinare asupra activității endonucleazei, s-au folosit concentrațiile lor recomandate în instrucțiuni precum și concentrații mai mari (de 2 și 4 ori), deoarece dependența de medicamente apare adesea și astfel devine necesară creșterea dozelor pentru a obține un efect terapeutic. În experimente microbiologice, a fost testat efectul combinat al diverșilor agenți terapeutici și profilactici și al endoglucinei asupra creșterii ciupercii Ascosphaera apis,

             În experimente, pentru a studia a efectului diverșilor agenți terapeutici și profilactici asupra activității endonucleazei, s-au preparat soluții model care conțin endonucleaza Serratia Marcescens sau endoglukin la o concentrație de 100 unități/ml, MgSO4 la o concentrație de 0,005 M și medicamente veterinare la concentrațiile recomandate  în instrucțiunile de utilizare a acestora, precum și de 2 și 4 ori mai mari decât acestea. Activitatea endonucleazei în aceste soluții și în soluții fără aditivi medicinali utilizate ca soluții de referință a fost determinată prin metoda experimentala.(M. Nestle și WK Roberts, 1969). Nivelul activității endonucleazei în soluțiile standard a fost considerat 100%.

             O unitate de activitate a endonucleazei a fost definită ca si cantitatea unei enzime care determină o creștere a densității optice a produșilor solubili în acid ai hidrolizei ARN cu o unitate optică (p.u) la o lungime de undă de 260 nm timp de 20 de minute la 37 ° C.

             În experimentele microbiologice pentru a testa efectul combinat al diverșilor agenți terapeutici și profilactici și al endogliukinei asupra creșterii ciupercii Ascosphaera apis, a fost utilizat material patologic dintr-o stupină sensibila la  ascosferoză. Proba contaminată a fost inoculată pe mediu Sabouraud și agar cu cartofi-glucoză (O.F. Grobov, A.K. Likhotin, 1989) cu adaos de endoglicină la o concentrație de 100 unități/ml, MgSO4 la o concentrație de 0,005 M și medicamente veterinare în doze diferite. Inoculările au fost incubate la 30°C timp de 3 zile. Coloniile crescute ale ciupercii au fost microscopate.

             Rezultate si discutii. În experimentele pentru studiul efectului agenților antibacterieni utilizați în apicultura asupra activității endonucleazei, s-au folosit OR-100, furazolidona și Oxyvit. OR-100 este foarte eficient împotriva bacteriilor gram-negative și gram-pozitive și a culturilor fungice; furazolidona este un medicament antibacterian utilizat pe scară largă; oxyvit este un remediu de încredere în tratamentul bolilor de loc (loca americana și europeana). Datele privind efectul acestor agenți asupra activității endonucleazei în preparatele de endonuclează de endoglicină și Serratia marcescens sunt prezentate în tabelul urmator:

              După cum se poate observa din tabel, OR-100 și furazolidona au un ușor efect de activare asupra activității endonucleazei, în timp ce oxyvit s-a dovedit a fi un inhibitor foarte puternic al acesteia. Oxyvit conține clorhidrat de oxitetraciclină, concentrat de proteine-amino-microelement și vitamina C  (V.I. Maslennikova, N.Z. Zenukhina, 1998), care creează un mediu acid (pH 3,5) în soluțiile medicamentoase. Acest lucru, aparent, explică efectul inhibitor al oxyvit, deoarece pH-ul optim al endonucleazei este în regiunea alcalină (pH 8,2).

             Efectul agenților antifungici asupra activității endonucleazei a fost testat pentru o serie de medicamente utilizate pe scară largă în apicultura. Ascocin și Dicobin-B - medicamente pentru tratamentul ascosferozei și nosematozei; Nistatina și Levorină - antibiotice antifungice; Unisan și Apifungin - agenți împotriva ascosferozei. Datele privind posibilitatea utilizării combinate a acestor medicamente cu Endoglukin sunt prezentate în tabelul 2. Ele indică un efect neglijabil al medicamentelor antifungice dovedite asupra activității endonucleazei. O scădere ușoară a activității (până la 89%) în prezența apifunginei la concentrația recomandată nu împiedică utilizarea sa combinată cu Endoglukin, cu toate acestea, o creștere a concentrației de apifungin este inadecvată, deoarece determină o suprimare mai puternică a activitatea endonucleazei.

              Efectul medicamentelor acaricide asupra activității endonucleazei a fost testat pe exemplul preparatelor Bipin și Bivar, care sunt utilizate pentru combaterea varoozei la albine. Datele privind efectul acestor medicamente asupra activității endonucleazei sunt prezentate în tabelul 3, din care se poate observa că bipinul și bivarul au un ușor efect de activare asupra activității endonucleazei și, odată cu creșterea concentrației de bivar, activarea enzimei este îmbunătățită.

             Experimentele efectuate nu au evidențiat diferențe semnificative în ceea ce privește efectul medicamentelor de uz veterinar asupra activității medicamnetului Endoglukin, deși se poate observa că nivelul de activitate în majoritatea cazurilor a fost mai mare atunci când acționează asupra endonucleazei. Aparent, acest lucru se datorează faptului că dextranul cu greutate moleculară mică, care face parte din Endoglukin, previne interacțiunea directă a moleculelor de enzime și principiul activ al agenților terapeutici și profilactici, în urma căruia activitatea enzimatică fie crește, si a fost observat pentru majoritatea aditivilor, fie scade.

            Studiile noastre biochimice au arătat posibilitatea utilizării combinate a preparatului Endoglukin cu marea majoritate a medicamentelor veterinare testate. O excepție este agentul Oxyvit, a cărui utilizare simultană cu preparate pe bază de endonuclează Serratia marcescens este inadecvată. Se poate presupune că tratamentul coloniilor de albine cu Oxyvit și Endoglukin este posibil cu un interval de câteva zile, sub rezerva unui studiu detaliat al schemei de utilizare a acestora. Incompatibilitatea preparatului Endoglukin cu Oxyvit oferă motive pentru a avertiza apicltorii împotriva utilizării combinate necontrolate a diferitelor medicamente de uz veterinar.

            Intr-un laborator microbiologic, a fost testat efectul combinat al mai multor agenți terapeutici și profilactici și al Endoglukin asupra creșterii ciupercii Ascosphaera apis. Pe plăci cu mediu nutritiv a fost monitorizată prezența creșterii fungice, care a fost identificată prin caracteristici morfologice și microscopie ca varianta Ascosphaera apis ap/5 (O.F. Grobov, A.K. Likhotin, 1989). Rezultatele acestui experiment sunt prezentate în Tabelul 4.

             Experimentele au arătat că, odată cu utilizarea combinată a Dicobin-B, OP-100 și furazolidonă cu endoglukină, creșterea ciupercii Ascosphaera apis a fost suprimată în mod fiabil dacă a fost respectată doza recomandată de medicamente In cazul OR-100 s-au inregistrat rezultate foarte bune și la concentrații mai mici (de 2 și 4 ori). Cu toate acestea, cu o scădere a dozei de furazolidonă, nistatin și levorin la jumătate față de cea recomandată, nu a fost observată inhibarea creșterii fungice, precum și în prezența endoglucinei în monoterapie.

             Astfel, ambele serii de experimente indică o bună compatibilitate a endoglukinei cu o serie de agenți terapeutici și profilactici testați de noi, cu excepția Oxyvit. Acest lucru ne permite să continuăm să lucrăm cu scopul de a elabora schemele de utilizare a acestora, precum și de a crea preparate complexe de acțiune multifuncțională pe baza endonucleazei Serratia marcescens pentru tratamentul bolilor albinelor.